En spektrofotometer används för att bestämma koncentrationen av vissa föreningar, såsom protein, i en lösning. I allmänhet lyser ett ljus genom en kyvett fylld med ett prov. Mängden ljus som absorberas av provet mäts. Eftersom föreningar absorberar ljus i olika spektralområden måste rätt våglängd ställas in för analysen. Det finns många sätt att beräkna koncentrationen av okända prover genom spektrofotometri, men att använda referensstandarder ger den bästa noggrannheten. Dessutom anger standarder även om spektrofotometern inte fungerar eller om andra problem med analysen.
Beräknar genom raka linjeekvationer
Analysera referensstandarder i början av analysen. Standarder är kända koncentrationer och används för att kalibrera utrustning och kontrollera noggrannheten. Alla prover bör falla inom standardernas arbetsområde. Om inte, måste proverna spädas eller koncentrationen av standarder ökas.
Gör ett spridningsdiagram eller en linje graf med standardvärden för koncentration och absorptionsförmåga. Koncentrationen kommer att ligga på y-axeln, absorbansen på x-axeln. Till exempel är standarderna 1 ppm, 2,5 ppm och 5 ppm. Den angivna absorptionsförmågan var 1 ppm= 0,25, 2,5 ppm= 0,5 och 5 ppm= 0,75.
Formatera trendlinjen för att visa en ekvation på grafen. Ekvationen kommer att visa formeln y=mx+b. Till exempel, med hjälp av standarderna i steg 2 är ekvationen y= .1224x + 0,1531. De flesta trendlinjer fångas upp vid noll, men det beror på analysmetoden och R-kvadratvärde.
Analysera okända prover och registrera absorbansavläsningar.
Använd ekvationen (y=mx+ b) för att bestämma koncentrationen av prover.
Låt ”Y” vara lika med koncentrationen. Detta är vad som kommer att lösas för.
Låt ”X” vara lika med provets absorptionsförmåga. Detta är absorbansen som mäts av spektrofotometern.
Tillåt ”” att lika med lutningen och ”b” för att vara lika med y-avsnittet. Båda är givna, men om trendlinjen tvingades genom 0, kommer ”b” att vara 0.
Lös för koncentration. Använd exemplet i steg 3 och ersätt ”x” som en given absorptionsförmåga på 0,563. Därför:
y= .1224(.563) + 0,1531
y (koncentration)= .222011
Saker du behöver
Spektrofotometer
Referensstandarder
Okända prover
Tips
Koncentrationens enheter kommer att vara desamma som standarderna. Till exempel är enheter delar per miljon (ppm) eller delar per miljard (ppb).
Referensstandarder och prover är lätt förorenade.
Varningar
Läs alltid alla delar av analysen eller metoden innan den utvecklas.
